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SBC 新冠病毒检测小科普:核酸检测 vs 抗体检测 vs 抗原检测

核酸检测

新冠病毒核酸检测是判定被检测者是否感染的金标准,这里用到的方法通常是实时荧光定量PCR技术(real time-PCR)。

 

在这个过程中,首先取样后抽提新冠病毒核酸的RNA, 通常采用反转及扩增一步法,检测探针为带有荧光标记的能够与模板相匹配的短核苷酸序列,反应体系上机后,随着PCR扩增,荧光信号逐渐积累并被机器检测到,分析人员可通过该荧光信号的强度来对样本中是否含有新冠病毒核酸进行判读。

 

结 果 判 读

当两个待检测基因ORF1ab和N基因均报告阳性时,可认为样本为阳性,只有一个基因报告阳性时需重新检测。

 

抗体检测

新冠病毒抗体检测是通过检测体内是否存在新冠病毒抗体从而判断被检测者是否发生感染的一种间接检测手段,在这个过程中,新冠病毒的外壳蛋白是引起人体发生特异性免疫的抗原。


而在新冠病毒感染的全过程中,血清中主要存在下列两种亚型的抗体:

IgM:病毒入侵后,特异性免疫应答产生的第一种抗体,存在于感染早期。

IgG:抗原入侵后,血清中主要存在的一类抗体,其产生晚于IgM,但能够长期存在于痊愈人群的血清中。

 

抗体检测试剂盒(胶体金法)原理:

抗体修饰形式:胶体金标记的抗人IgM/IgG单抗,当分散的胶体金标记因抗原-抗体特异性反应结合后会显色。

抗体搭载载体:NC膜

 

检测试剂盒上三线的含义:

1)M线:包被了抗人IgM单抗,当遇到样品中的IgM时显色。

2)G线:包被了抗人IgG单抗,当遇到样品中的IgG时显色。

3)C线:质控线。

 

 

结 果 判 读

 

 

IgM结果

IgG结果

临床意义

未被感染或处在感染窗口期

+

感染早期或急性感染期

+

+

感染活跃期或感染恢复期,病毒已被清除但IgM还处于可检测水平

+

感染中晚期、或复发状态、或或被感染者已痊愈

*抗体检测需要结合核酸检测来对感染者处于哪个时期做更详细的分类。

 

抗原检测

新冠病毒抗原检测是另一种能够用于判定被检测着是否发生感染的直接检测手段,这里的被检目标是包被在新冠病毒核酸外的蛋白质外壳,同时为了进行体外抗原-抗体特异性反应,需要制备高特异性的抗新冠病毒外壳蛋白(主要是N蛋白)的单克隆抗体。

 

抗原检测试剂盒(胶体金法)原理:
夹心法——即抗原首先偶联抗新冠病毒N蛋白抗体(一抗),再偶联二抗放大反应一遍被检测者自行判读。

 

 

抗原检测试剂盒上从左到右功能区域如下:

样本池:用于滴定被测样本混合溶液。

抗体偶联池:样本溶液中的新冠病毒外壳蛋白在这里与单克隆抗体发生特异性结合。

T线:抗原-一抗复合物在这里与二抗结合后显色或发光。

C线:含有抗人IgG抗体,用作质控。

 

结 果 判 读

 

 

T线结果

C线结果

临床意义

无效检测

+

无效检测

+

未被感染

+

+

发生感染

 * T线无论深浅,均说明发生了感染,经抗原检测为阳性的被检测者需要再做核酸检测进一步确诊。

 

总 结

三种检测方法总结和优缺点:

 

 

参考文献:

1. Y HeeMin et al. Nucleic Acid Testing of SARS-CoV-2. Int J Mol Sci; 2021; 22(11) 6150

2. Z Li, et al. Development and clinical application of a rapid IgM-IgG combined antibody test for SARS-CoV-2 infection diagnosis. J Med Virol.2020; 1-7

3. P Rai et al. Detection technologies and recent developments in the diagnosis of COVID-19 infection. Appl Microbiol Biotechnol. 2021; 105(2): 441–455.